伍 莉 西南農業大學動物科技學院
王一鳴 徐 琴 魏福建 西南農業大學水產學院
摘 要 用微生態制劑EM作為飼料添加劑飼喂大口鯰，經40 d的試驗，測定其血液學指標（包括紅細胞數、白細胞數、血紅蛋白含量、紅細胞大小、紅細胞滲透脆性、白細胞分類記數、紅細胞沉降率和紅細胞比積）。結果顯示，試驗組大口鯰的紅細胞數和血紅蛋白含量等指標均優于對照組。表明EM能改善大口鯰的血液學指標，提高機體的新陳代謝，加快其生長速度。
EM是英語Effective和Microorganisms的縮寫，是目前比較常見的一種微生態態制劑。它是由日本琉球大學比嘉照夫教授于80年代初從天然環境中篩選出微生物菌體，培養、繁殖后制成的含有大量有益菌的活菌制劑，由光合細菌、乳酸菌、醋酵母菌、放線菌等10個屬80多種微生物復合培養而成。EM不含任何化學有害物質，無毒副作用，無殘留和二次污染，不產生抗藥性。目前已在日本、巴西、美國、中國、泰國等40多個國家推廣使用，在促進植物生長、增強畜禽抗病能力、增強養殖對象的免疫力、去除糞便惡臭、改善生態環境和提高產品質量等方面都表現出良好的效果。EM目前在整個水產養殖中大多是直接作用于水體，其作用機理主要是EM原露滲入水體后，能抑制病原微生物和有害物質，調節養殖的生態環境，提高水中的溶氧量，促進養殖生態系統中的正常菌群和有益藻類活化生長，保持養殖水體的生態平衡。EM若拌入餌料投喂，可直接增強魚類的吸收功能和防病抗病能力，促進其健壯生長。
大口鯰（Silurus meridionalis Chen）原名南方大口鯰，俗稱河鯰、鯰巴朗、叉口鯰等。它為鲇形目、鲇科、鲇屬，在天然水域中以魚蝦為食，是兇猛的肉食魚類。它是我國長江出產的名優魚類之一，目前已在我國大力推廣養殖。關于大口鯰的生物學特性和養殖等已有較多研究，但是關于在其飼料中添加微生態制劑對其血液學指標影響的研究報道卻很少。而這方面的研究結果對于了解大口鯰的正常生長和進行人工飼料的研究并改良目前的養殖方式、推廣健康養殖有著重要的意義。筆者旨在通過對用不同濃度EM原露飼喂的大口鯰血液學指標進行測定，了解添加微生態制劑EM對其血液學指標的影響，為合理配制飼料、改善魚的體質、降低養殖成本、提高養殖效益、推廣養殖新模式提供一定的理論依據。
1 材料和方法
1．1 試驗材料
1．1．1 EM原露 由江西天意生物技術開發有限公司提供,每毫升菌液活菌數不少于108個,pH值≤3.5，棕褐色。
1．1．2 試驗魚 將800尾大口鯰隨機分為4個試驗組，每一試驗組設一平行。1#、2#為對照組，其余為試驗組。每組放養100尾大口鯰，分別統計每組試驗魚的平均始重、平均體長等數據。試驗各組均用1.7m×1.8m×0.7m水泥池進行微流水養殖。先將魚暫養1周，待魚全部適應環境、正常攝食后開始試驗。
1．1．3 EM增活及飼喂方法 將EM原露、紅糖、常水按1kg：10kg：150kg比例混合，在30～33℃條件下靜置24 h增活微生物，按餌料重的0、2、4、6 %的比例量取EM發酵液，噴于餌料上，晾干投喂。每天早上07：00、傍晚19：00、夜間23：00左右各喂1次，投餌量以魚0.5 h內吃完散開關略有剩余為標準。試驗時間為40 d。
1．1．4 基礎日糧（見表1）。
1．2 樣本處理
試驗結束后先停止投食，讓魚饑餓1 d后統計每組魚的數量，測量體長，稱重，即得每個試驗組的生長數據，再與試驗前的數據進行比較，即可得出添加不同濃度的EM對大口鯰生長狀況影響的差異（見表2）。最后斷尾取血，進行紅細胞數、白細胞數、血紅蛋白含量、紅細胞沉降率、紅細胞比積等8個血液學指標的測定。
1．3 測定方法
1．3．1 血紅蛋白含量 沙利氏法。
1．3．2 紅細胞數 以赫姆氏液為稀釋液，將血樣稀釋200倍后，用血細胞記數板記數。
1．3．3 白細胞數 以提爾克氏溶液為稀釋液，將血樣稀釋20倍后，用血細胞記數板記數。
1．3．4 紅細胞大小 用測微尺在油鏡下，每尾魚血涂片測量10個紅細胞長徑和短徑，取其平均值。
1．3．5 白細胞分類記數 用瑞氏染液將血片著色，于油鏡下分別記下各類白細胞的百分比率。
1．3．6 紅細胞脆性 用1 %NaCl溶液配成不同濃度梯度低滲溶液，室溫下靜置2 h，觀察溶血結果。
1．3．7 紅細胞沉降率 用Westergren法進行測定，最后讀取紅細胞沉降的毫米數。
1．3．8 紅細胞比積 將抗凝血裝入紅細胞壓積管內（溫氏壓積管），再以4000 r/min的速度離心30 min，最后計算紅細胞比積之百分數。
2 試驗結果
2．1 生長情況
由表2可知添加不同濃度EM對大口鯰的生長影響，由高到低依次為6 %＞4 %＞2%＞0。隨著添加濃度的減小，EM對大口鯰的促進生長作用也隨之減小。當EM為最大濃度6 %時，其平均增重比對照組高出27.39%，促長效果極其明顯。試驗過程中添加EM的3個試驗組大口鯰僅出現零星死亡（大口鯰相互爭斗、殘殺造成體表受損而患病所致），而未添加EM的對照組則成活率明顯受到影響。
2．2 血液學指標
由表3可見添加不同濃度EM對大口鯰的血液指標影響情況。添加不同濃度的EM均能優化大口鯰的血液學指標，特別是對紅細胞數、血紅蛋白含量、紅細胞比積以及血沉等影響較大。除此之外，紅細胞的滲透脆性也隨EM添加濃度的升高而降低。
3 結果及分析
3．1 EM與血象 由表3可以看出，在飼料中添加不同濃度的EM后，試驗魚的血液學指標出現了規律性的變化。隨著EM在飼料中添加量的增加，紅細胞數、血紅蛋白含量、血沉以及紅細胞比積等指標呈上升趨勢，而紅細胞脆性則逐漸降低。由此可見，EM可以改變魚類的血液學指標，促進機體的新陳代謝，這與黃永春等利用EM作為飼料添加劑飼養建鯉，試驗組魚類的紅細胞數量和血紅蛋白指標均優于對照組的結論是一致的。蘇聯學者普契科夫和費多洛娃研究認為，食物的成分也能對魚類的血液成分（特別是紅細胞和血紅蛋白含量）發生明顯影響。
表1 基礎日糧配比及營養水平
——————————————————————————————————————————————————
魚粉 蠶蛹 面粉 米皮糠 豆粕 菜粕 玉米蛋白粉 磷酸二氧鈣 預混料 粘合劑
——————————————————————————————————————————————————
30 6 30 8 6 12 5 1.5 1.2 0.3
——————————————————————————————————————————————————
表2 EM飼養大口鯰的增重效果
——————————————————————————————————————————————————
對照組(0) 試驗1組(2 %) 試驗2組(4%) 試驗3組(6 %)
——————————————————————————————————————————————————
1# 2# 3# 4# 5# 6# 7# 8#
——————————————————————————————————————————————————
開始體長(cm) 10.5-18.2 10.2-18.0 10.3-17.8 10.5-17.5 10.2-18.3 9.0-17.5 10.1-18.4 10.5-18.5
結束體長(cm) 12.1-23.4 12.0-23.0 13.2-23.7 13.0-23.5 13.7-24.4 13.5-24.0 14.2-25.0 14.5-25.1
平均始重(g) 18.90 19.10 19.00 18.75 18.80 19.00 18.90 19.00
平均末重(g) 81.38 82.18 89.74 88.71 96.95 96.91 98.54 99.47
平均增重(g) 62.48 63.08 70.74 69.96 78.15 77.91 79.64 80.47
平均日增重(g) 1.56 1.58 1.77 1.75 1.95 1.95 1.99 2.01
平均值 1.57 1.76 1.95 2.00
凈增重率(%) 330.53 372.98 412.69 422.16
成活率(%) 87.0 93.0 96.0 95.5
——————————————————————————————————————————————————
表3 EM飼養大口鯰的各項血液指標變化
——————————————————————————————————————————————————
試驗3組(6%) 試驗2組(4 %) 試驗1組(2%) 對照組(0)
—————————————————————————————————————————————
測定項目 平均值 平均值 平均值 平均值
變化范圍 變化范圍 變化范圍 變化范圍
(X±λ) (X±λ) (X±λ) (X±λ)
——————————————————————————————————————————————————
紅細胞數(萬/mm3)80-260 212.3±37.73 171-255 201.4±29.46 161-248 190.9±14.20 150-234 182.3±17.58
白細胞數(萬/mm3)1.15-4.65 1.88±0.54 1.20-4.08 1.82±0.48 1.23-4.61 1.80±0.64 1.31-4.80 1.93±0.67
血紅蛋白含量(g/%)5.80-9.72 7.24±0.97 5.52-8.99 6.82±0.58 5.34-8.40 6.60±0.43 4.2-7.60 5.97±0.40
紅細胞長徑9.60-14.4 11.59±1.56 10.08-14.4 11.66±1.3 12.00-13.2 11.78±0.48 12.00-16.8 12.23±1.78
(μm) 短徑 6.72-8.40 7.26±0.57 7.20-9.60 7.35±0.75 7.24-10.08 7.48±0.93 7.68-11.02 8.36±1.35
淋巴細胞 40-85 67.2±13.2 58-89 67.3±12.4 35-88 67.1±12.8 42-90 68.3±3.6
白細胞 中性粒細胞 11-18 28.3±9.1 7-27 29.2±2.4 10-39 29.5±2.3 11-38 28.3±5.0
分類 堿性粒細胞 0 0 0 0 0 0 0 0
(%) 酸性粒細胞 2-5 3.3±2.16 2-4 3.2±0.98 1-6 3.1±2.16 2-7 3.1±1.73
單核細胞 0-1 0.3±0.12 0-1 0.2±0.1 0-1 0.2±0.21 0-4 0.3±0.61
RBC脆性(gNaCl%) 0.45-0.25 0.45-0.30 0.45-0.30 0.55-0.40
血 沉(mm/h)1.8-3.0 2.23±0.16 1.5-2.5 1.97±0.46 1.5-2.4 1.83±0.31 1.3-2.0 1.71±0.26
紅細胞比積(%)25.2-67.3 44.7±67.3 25.2-65.2 42.8±2.0 25.7-62.7 41.4±3.8 22.2-68.9 40.8±4.3
——————————————————————————————————————————————————
血液是動物體內一種極其重要的組織。正常血液學指標值能反映物種的屬性和動物的正常生理狀態。魚類血液與機體的代謝、營養狀況以及疾病有著密切的關系，當魚體受到外界因子的影響而發生生理或病理變化時，必定會在血液指標中反映出來。因此，血液指標被廣泛地用來評價魚類的健康狀況、營養狀況以及對環境的適應狀況，是重要的生理、病理和毒理學指標。對魚類血液進行研究，不僅在魚類血液生理的基礎理論方面是重要的，而且在魚類的人工養殖、魚病防治方面也是重要的。
魚類血注液學指標受多種因素的影響而有較大的差異。雌鯽魚饑餓半個月，紅細胞數下降40%；但當餌料充足、營養條件好時血紅蛋白含量明顯增高。沈曉民等在研究“團頭魴血液指標與水環境的關系”時發現，魚類缺氧代償能力的獲得主要靠增加紅細胞和血紅蛋白的數量，而不是增加紅細胞體積、胞內血紅蛋白含量和血紅蛋白濃度。白細胞的主要作用是保護機體、抵御病害的侵襲。魚類在患病，特別是出現炎癥時，白細胞數量常常增多。
試驗結果表明：在大口鯰日糧中添加微生態制劑EM，3個試驗組中的紅細胞數量和血紅蛋白含量均比對照組有較大的提高，大口鯰運輸O2和CO2的能力加強，從而在一定程度上改善了機體組織的代謝強度。說明EM能在一定程度上改善了機體的微生態環境，促進魚體的攝食、消化和吸收，使魚類表現出較佳的生理狀態——血液學指標明顯改善、耗氧率下降，從而具備較高的抗逆性（如抗病、抗低氧等）。在正常情況下，血紅蛋白含量的變化與紅細胞數量有直接的關系，表現為隨紅細胞數量增加而增加。而血紅蛋白的主要功能是運輸氧和二氧化碳。因此，當機體血紅蛋白含量增加時，新陳代謝活動加快，使魚類對抗惡劣環境的應激能力提高，以適應生存的需要。
試驗測定結果還表明，在大口鯰日糧中添加EM能夠調節機體微生態平衡，促進新陳代謝，改善紅細胞膜的組成成分和膜的流動性，使紅細胞膜的滲透脆性下降，而起到一種保護作用。證明了微生態制劑在維持機體正常代謝水平及正常生理功能方面有非常重要的作用。這一結論與吳垠等的研究結果是一致的。
3．2 血液指標與生長 試驗對添加不同EM濃度的飼料飼養大口鯰及其血液學指標的測定結果表明，隨著飼料飼養大口鯰及其血液學指標的測定結果表明，隨著飼料中EM添加量的增加，大口鯰生長速度得到了提高，同時對應的大口鯰血液學指標也得到了明顯的改善。許多研究表明，魚類對環境具有較強的適應性，在冬季魚類的血細胞數量減少，而在春季產卵前劇烈增加；血紅蛋白隨著血細胞的增加而增加；患病魚體內白細胞數量常常增多。顯示了在良好的營養狀態和生理狀態下，血細胞數量和血紅蛋白量上升趨勢，而白細胞數量則呈現下降趨勢。試驗結果也證明了這一點：EM進入魚體腸道后，改善了魚體消化和吸收狀態，促進了大口鯰的快速生長（見表2）。同時使大口鯰血液學指標得到了明顯的改善（見表3），特別是血細胞和血紅蛋白量的增加，保證了魚類機體組織對O2的需求和CO2的排除，提高了大口鯰的代謝強度，使大口鯰的生長速度加快、成活率提高。
3．3 EM與魚類生長 由表2可知，在飼料中添加EM后，大口鯰生長速度有了較大的提高，試驗3組的大口鯰日增重達到2.00 g，凈增重率高達422.16 %，比對照組大口鯰的生速度提高了27.39 %；試驗2組的大口鯰日增重達1.95 g，凈增重率為412.69 %，比對照組大口鯰的生長速度提高了24.2 %；即使是生長速度較差的試驗1組的凈增重率也達到了372.98%，比對照組大口鯰的生長速度提高了2.10 %。由此可見，添加EM后，大口鯰的生長速度明顯提高，日增重率也呈現上升趨勢。這一結果與我國水產工作者對其他水生動物所作的試驗是一致的。
劉江軍等在河鲀養殖試驗中發現，飼料中添加EM后河鲀增重率明顯提高，試驗池河鲀凈增重125g，增重率達208.3 %，而對照池增重76.5g，增重率只有130.7 %。黃永春等將EM添加在飼料中飼喂長毛蝦時發現，試驗組的成活率均高于對照組，增重率也均優于對照組。EM中的各種有益微生物不僅有較多的優良蛋白質、還含有豐富的維生素、類胡蘿卜素和生長促進因子。因此，EM不僅能改善水質環境，而且能提高餌料生物的品質和對蝦的攝食量以及消化吸收能力，促進生長。
王旭明等發現，EM對飼料具有明顯的酸化作用，能提高飼料中氨基酸的含量，這可能是EM提高蛋白質和氨基酸的利用率，促進動物生長的機理之一。在養殖業中，能提高飼料酸度（pH值降低）的一類物質被稱作飼料酸化劑。將飼料酸化可以改善動物的生產性能。EM在發酵飼料過程中，一方面能顯著降低飼料的pH值，起到了酸化劑的作用，使胃內pH值下降，從而激活胃蛋白酶原轉化為胃蛋白酶，促進蛋白質的分解；對于消化系統尚未發育完善的幼齡動物來說，作用更明顯。另一方面，酸性物質還能降低胃腸蠕動，減緩排空時間，從而提高消化吸收率。同時，由于酸性物質的配位作用，可促進胃腸道對鈣、磷等礦物質的吸收。飼料酸化還是提高日糧適口性的重要因素。日糧中的酸能直接刺激口腔內味蕾細胞，使唾液分泌增多而增進食欲；而且有機酸具有獨特的芳香，可掩蓋飼料中的不適氣味。除此之外，胃腸道的酸性環境還可以阻止機體內部大腸桿菌的繁殖，刺激有益菌的生長。該種有益菌進入動物體后可作為一種外來抗原，誘導T細胞和B細胞的增殖和分化，提高動物的免疫能力。
4 小結
4．1 EM作為飼料添加劑，能明顯提高大口鯰的生長速度和成活率，且添加量越多效果越明顯。
4．2 EM作為飼料添加劑，能明顯的改善大口鯰的血液學指標，特別是對于提高魚體血液中血細胞數和血紅蛋白含量具有積極作用，這對于促進魚類的健康生長有著重發的意義。
5 尚需深入研究的課題
5．1 EM是活的復合微生物菌群，在進行飼喂時究竟是何種菌對血液學指標起主要作用還有待進一步研究。
5．2 試驗所添加的EM濃度只是針對大口鯰，在其他魚類養殖中的最適濃度還需進一步探討。
5．3 試驗中添加的EM最高濃度是6 %，添加更高濃度是否效果更佳尚有待進一步研究。